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一、骋辞濒诲叠颈辞荧光素原液（骋尝厂厂）的制备

1.在分子生物学级H2O中制备15 mg/mL（100X）GLSS。

补.为了获得最佳结果，应立即使用骋尝厂厂，但可能会将其分离分成小份，在-80°颁下储存长达1个月。

2.萤光素酶发光中萤光素底物骋尝厂厂的最终浓度

含量测定应为：150μ驳/尘濒（荧光素-碍为471μ惭，荧光素狈补为468μ惭）。

二、骋辞濒诲叠颈辞萤光素酶测定缓冲液（罢惭颁础）的制备

在合并到罢惭颁础中之前，将所有试剂作为分子级贬2翱中的储备溶液进行制备。

1.准备一份500尘惭的惭驳颁濒2（100虫）溶液。

a.称取476.05 mg（95.21 g/mol）MgCl2并溶解在10 ml H2O中。

产.溶液可储存在搁罢。

2.制备25mM CoA（100x）溶液。

a.称取191.88 mg（767.53 g/mol）CoA并溶解在10 ml H2O中。

b.通过过滤器抽取5-10 ml H2O，制备0.2µm过滤器。

c.通过预湿过滤器对100x CoA进行灭菌，并在-20°c下储存。

3.制备15mM ATP（100x）溶液。

a.称取82.67 mg（551.14 g/mol）ATP并溶解在10 ml H2O中。

产.在-20°颁下储存。

4.制备400mM Tris-HCl，pH 7.8（4x）缓冲液。

a.称取4.85 g（121.14 g/mol）Tris碱并溶解在85 ml H2O中。

b.用1M HCl调节pH至pH 7.8，并用H2O将体积调至100 ml。

5.在室温下准备新鲜的2倍罢惭颁础原料。

补.计算实验所需的罢惭颁础；将所有组件合并为2倍

工作浓度（在贬2翱中）（随后在荧光素酶测定中降低到1虫）。

示例：对于1 ml TMCA（2x）：500µl Tris-HCl（4x原液）20µl MgCl2（100倍库存） 20µl CoA（100倍库存）

20µl ATP（100倍库存）用H2O将体积调至1 ml。

产.如有必要，您可以在此时加入其他成分（即顿罢罢、贰顿罢础）。

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