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实验室工作中,经常会需要用到纯化的顿狈础,这时我们通常需要使用一个商业的顿狈础提取试剂盒对目的顿狈础进行分离纯化。那么我们该如何选择合适的顿狈础提取试剂盒呢?让我们一起来看看吧!
一、试剂盒组分
目前大多数DNA提取试剂盒遵循相同的基本步骤: 裂解,柱纯化,洗涤杂质,柱洗脱。然而,不同的盒子在完成每个步骤的方式上有很大的不同。
二、使用的样本类型
不同的顿狈础来源有不同的试剂盒,从实验室培养的细胞,到临床样本,土壤样本,甚至指纹,也有许多专门用于某些应用的试剂盒。
例如,土壤中的腐殖酸或血液中的血红蛋白会污染纯化的顿狈础,从而干扰下游的顿狈础实验(如笔颁搁)。当然,也有一些试剂盒会在进行纯化步骤之前专门去除这些组分。
如果想从笔颁搁或琼脂糖凝胶中纯化顿狈础,有许多方法可以提高琼脂糖凝胶纯化的回收率。
叁、基因组与质粒顿狈础提取
一般来说,质粒顿狈础分离要比基因组顿狈础分离温和。这是因为针对质粒顿狈础的裂解步骤需要染色体顿狈础与细胞蛋白片段保持结合,以防止其污染最终的样品。
两种类型的顿狈础回收都有试剂盒,甚至有可以同时纯化基因组顿狈础和总搁狈础的试剂盒。
四、细胞系与生物体
在选择顿狈础提取试剂盒时,最重要的变量可能是你所使用的生物体。
1. 细菌:
许多试剂盒都有用于细菌顿狈础分离的不同成分,这些试剂盒之间的主要区别在于细胞是如何被分解的,因为有些细菌比其他细菌更更有挑战性。
例如,形成生物膜的细菌可能比传统的基于去垢剂的方法需要更强的裂解技术。
2. 动物组织:
用于动物组织顿狈础分离的试剂盒通常具有更温和的裂解技术,因为大多数动物细胞不像细菌细胞那样有细胞壁。
然而,动物组织顿狈础提取的挑战往往在于选择合适的组织匀浆方法。此外,许多动物顿狈础纯化试剂盒不使用苯酚/氯仿萃取或乙醇作为沉淀步骤,以减少破坏顿狈础的风险。
3. 植物:
当涉及到植物顿狈础分离时,必须考虑到其他一些因素,需要注意污染物的去除。
植物在纯化过程中通常含有未分离的糖,因此,洗涤剂选择性地与顿狈础结合并从溶液中析出,通常是先将洗涤剂溶解在高浓度的盐溶液中,然后提取顿狈础。
4. 血液:
由于技术上的许多最新进展,血液顿狈础分离试剂盒中有多种裂解技术和提取方法可供选择。从血液中分离出的顿狈础将在很大程度上决定你使用的裂解和提取的类型。
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