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适用于小鼠脑组织的细胞悬液的分离制备，本产物利用酶温和、快速有效地破坏细胞外基质，释放细胞，从而生成单细胞悬浮液。制备的单细胞悬液可用于单细胞测序、细胞培养或其他细胞相关检测。怎么使用呢？让我们一起来看看小鼠脑组织解离试剂盒的使用方法吧！

一、材料准备

1. 仪器：水浴锅（定期手动摇晃混匀）或杂交炉（转速 20 ~ 30 转/分钟）、水平离心机。

2. 试剂：PBS、FBS、RPMI 1640 培养基。

3. 耗材：低吸附枪头、离心管、20 μm 和 70 μm 的细胞筛。

二、操作步骤

准备工作：水浴锅或杂交炉设置到 37℃、配制含 5% FBS 的 PBS。 切取新鲜组织约 200 mg（黄豆粒小），如图 1。

图1 新鲜组织样图

1. 取一个5 mL 离心管，加入2160 μ尝 Buffer A，放入用PBS 清洗干净的组织样本，并剪碎。

2. 添加800 μ尝 的 Enzyme B 和10 μ尝 的Enzyme C，颠倒混匀。

3. 放在37℃水浴锅或杂交炉中20 ~ 30 min。消化过程中，使用水浴锅每隔3 ~ 5 min 手动摇晃混匀。使用杂交炉转速20 ~ 30 转/分钟左右。

4. 每隔3 ~ 5 min 质检一次细胞悬液，根据细胞总量及活性等确定消化停止时间。

5. 消化完成后，用70 μm 细胞筛进行过滤，收集滤液于新的15 mL 离心管中。

6. 加3 mL RPMI 1640 培养基或 5% FBS 的PBS 于消化的离心管中，上下颠倒涮洗管壁，涮洗液同样经过同一个70 μm 细胞筛进行过滤，收集滤液于第5 步的15 mL 离心管中。

7. 将收集液于4℃，300 ×g 离心5 min，弃上清。

8. 用5 mL 含5% FBS 的PBS 重悬沉淀，吹打混匀。

9. 放入水平离心机，4℃，300 ×g 离心5 min，弃上清。

10. 用含5% FBS 的PBS 重悬沉淀至2 mL。

11. 加入1 mL DRS（细胞碎片去除缓冲液），用5 mL 移液器缓慢吹打混匀10 次。不要涡旋振荡。

12.沿管壁缓慢加入3 mL PBS，轻轻覆盖在最上层，千万不要混匀，如图2。

        图2                                                                 图3

13. 务必使用水平离心机，并设置为居中的加速度和减速度，4°颁，3000 ×g，离心20 min。

14. 离心后，缓慢取出离心管。溶液分成3 层。缓慢吸出全部上清液（优先吸出碎片层），保留细胞沉淀（上清尽量飞补苍-辩耻补苍去除干净），如图3 和图4。

注：离心管要轻拿轻放，确保分层明显，不同层的溶液间不互相混合。

图 4 小鼠脑细胞碎片去除示意图

15. 向沉淀中加入适当体积的含5% FBS 的PBS，加入叁倍体积的红细胞裂解液（BA3311），冰上裂红5 min。具体可以参考BA3311 红细胞裂解液说明书。

16. 加入等体积的PBS 混匀，终止裂红，4°颁，450 ×g，离心5 min，弃上清。

17. 用10 mL 含5% FBS 的PBS 重悬沉淀，吹打混匀，4℃，300 ×g 离心5 min，弃上清。

18. 用50 µL ~ 2 mL 含5% FBS 的PBS 重悬沉淀，根据所需的细胞浓度调整重悬液的体积。

19. 若有明显细胞结团，则使用20 μm 细胞筛进行过滤，收集滤液于新的离心管中。若无明显细胞结团，则可跳过此步骤。

20. 用细胞计数仪对细胞悬液进行质控并记录。质控结束后请立即进行后续实验。

在使用的过程中，请按照的使用方法来进行使用，若有任何问题，请联系百奥益康试剂盒代理——国产性大战XX久久！